Prova sull'ossidasi

L'ossidasi è un enzima che catalizza l'ossidazione del citocromo ridotto

di Redazione Studenti 15 dicembre 2006
Essa viene messa in evidenza utilizzando un composto che nello stato ridotto è incolore, ma che assume una colorazione particolare allo stato ossidato.
Il test viene utilizzato per distinguere gli enterobatteri da pseudomonas

La prova si esegue su colonie batteriche. E’ opportune che le colonie non si presentino troppo colorate, come può accadere utilizzando taluni terreni selettivi, per evitare la difficoltà di interpretare l’eventuale positività.
E’  necessario inoltre evitare il prelievo delle colonie con ansa di Ni-Cr che può interferire con l’esito della prova.

Reattivo: da preparare al momento dell’uso data la sua rapida ossidazione
reattivo di Kovacs (sol. acquosa 1% di N,N,N,N terta-metil-p-fenilendiammina); il reattivo pronto per l’uso deve essere incolore
Esistono anche reattivi diversi per l’esecuzione della prova reperibili sul mercato anche sotto forma di dischetti, tamponi, striscette..

Materiale:
una striscia di carta da filtro
un bastoncino di legno o ansa di platino
una piastra petri, anche non sterile

Procedimento
mettere la striscia di carta da filtro nella piastra vuota
porre 1 – 2 gocce di reattivo sulla striscia
prelevare una colonia o una porzione di colonia con il bastoncino di legno
stemperare, in una zona ristretta, la colonia prelevata. Attendere 30 – 60 secondi

Lettura:
positività della prova: la comparsa di una colorazione viola intenso entro 30’’ – 60’’ 
negatività della prova la mancata comparsa della colorazione entro 30’’ – 60’’ 
Colorazioni che compaiono dopo 60 secondi non hanno significato di positività.
N.B. la prova può essere eseguita direttamente sulle colonie mettendo su di esse 2-3 gocce di reattivo. La lettura  è quella vista sopra, ma deve avvenire entro 10 – 20 minuti.

Norme di sicurezza
Precauzione / prevenzione

Rischio possibile

Prelevare con attenzione il reattivo, si possono usare guanti monouso

Tossicità del reattivo

Eseguire il test in un recipiente chiuso

Contaminazione

Lasciare il bastoncino di legno nella piastra petri dopo l’uso

Contaminazione

Eliminare il materiale utilizzato per la prova dopo sterilizzazione

Contaminazione

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